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在日常的微量核酸與蛋白質定量中，大家都會或多或少的遇到測量不準確的問題。這有時來源于主觀的判斷，也可能因為與其他方法的對比。樣品的定量結果與預期值出現一定偏差有時是正常的事情，可能是因為不同測量方法本身存在的差異，如使用Nano儀器與Qubit的結果對比，即NQ比（具體可參考“每天都提核酸，聽說過NQ比嗎？”），或者使用紫外法對比HPLC的結果。而對于單純的使用微量樣品進行基于紫外法的定量，如果出現很大的偏差，則可能是由于設備、樣品狀態和上樣操作等多種因素造成的，應當引起重視。
根據Implen對來自全球的超微量用戶的長期追蹤與統計，我們總結出了可能的四種大概率原因，希望大家在設備使用的過程中多加注意，輕松的使用超微量設備獲得可靠的結果。
光程漂移
超微量設備由于光程漂移而產生誤差的可能性占比為35%，是第一大可能因素。設備在使用一段時間后出現的性能下降，可能是相對普遍的，而對于超微量設備，較大的變數就在于光程系統的準確與漂移。各個品牌都會采用精密的光程設計，精確到微米級別，但隨著設備的使用，細小的部件磨損或漂移也可能導致光程的偏差，進一步表現為測量結果的偏差。且這種偏差將會被放大，這是由于設備的光程虛擬稀釋倍數造成的 – 吸光值測量結果需要乘以光程倍數，而同時誤差也將被放大同樣的倍數。
不同的設備可能有不同的光程切換設計，一些結構在切換的過程中將會產生機械切割，需要通過維護和光程校準，修復偏差，可參考廠家的說明書或維護指南。Implen所采用的真實光程技術：即錨定光程切換技術，采用電磁彈片的切換方式，在兩個精確定義的光程間切換，無中間位置，可確保光程的準確性，而無需進行維護和光程校準。
混勻問題&濁度
樣品的均質性是濃度測量的前提，由于混勻或濁度的問題導致的測量誤差，可能性占比達30%。以正確的方式混勻樣品，是測量前的必要步驟，可通過渦旋、離心、震蕩、彈撥樣品管等多種方式實現。一些特殊樣品，槍頭取樣的位置不同也可能導致測量結果不同，如易產生濃度梯度或易沉降的樣品。一些樣品中具有一定的濁度，雖然可通過背景校正進行修正，但仍不能排除由此導致的測量誤差，濃度測值通常會偏高，需要進行具體評估。在嚴格的場合下，可通過雙波長或多元散射校正的方式進行修正。NanoPhotometer?具有濁度警告功能，可提示用戶較差的樣品質量和潛在問題。
樣品&上樣問題
有時樣品本身是存在問題的，和上樣問題一起達到了20%的誤差可能性占比。如一些溶解在高鹽緩沖液或在待測波長處具有吸收的緩沖液中的樣品。在空白測量的時候，實際上引入了空白基線的不確定度，樣品測值時可能會不穩定，甚至會出現負數。因此，樣品成分要具備方法學適用性。如果確實存在一些具有共同吸收的成分，則需要具體評估結果的可靠性，或降低置信預期。
一些錯誤的操作習慣，尤其是上樣手法，將影響測量結果。如習慣使用槍頭涂抹樣品，這將導致樣品過于平鋪在樣品臺上，實際用于檢測的樣品量可能減少，無法形成液柱，或不滿足實際樣品體積。一些容易有氣泡的樣品，如溶解在甘油中的蛋白質樣品，移液時應避免吸入氣泡。黏度較高的樣品可利用反向移液，避免吹出氣泡。
樣品蒸發
在一些場景下，樣品蒸發的問題將產生可觀的偏差。如設備放置在空調出風口，樣品液柱不可避免的產生蒸發，將得到偏高的檢測結果（但純度比值通常不會改變）。一些設備如需在層流或生物安全柜中使用，將影響更大。因此，設備的放置位置需要遵循廠家的手冊，避免這些外部因素影響（包括震動）。采用樣品壓縮法的Implen產品，采用封閉的檢測環境，可避免測量過程中蒸發的影響，更可適用于微量樣品動力學分析等應用。對于一些含有有機溶劑成分的樣品，蒸發的影響更加可觀，一些因素共同作用，可能導致很大的偏差。
以上四類原因是導致微量分光光度計產生測量誤差的常見可能因素，有時候可能是多種因素共同作用導致測量偏差較大，充分了解設備的原理、操作方法和樣品狀況，有助于獲得更加可靠的數據。找出原因，對癥下藥，優化實驗過程，更加輕松、省心的進行測量。關于超微量的任何問題，您都可以咨詢德國IMPLEN。
